Assisted reproductive technologies

Einleitung

In den letzten Jahren ist die Anzahl der gentechnisch hergestellten Mäuse dramatisch angestiegen. Darüber hinaus ist der rasante Fortschritt bei der Entwicklung von Techniken zur Genom-Editierung (TALEN und CRISPR / Cas9) für die molekularbiologische Forschung bemerkenswert, so dass ein genetisch manipulierter Mausstamm in wenigen Monaten leicht hergestellt werden kann. Die Produktion wurde durch Fortpflanzungstechniken wie In vitro Fertilisation (IVF), Embryonen- und Spermakryokonservierung und Embryotransfertechniken unterstützt. Solche Techniken sind zu unschätzbaren peripheren Technologien geworden und ihre Verwendung expandiert schnell.

Übersicht

Zur Unterstützung Ihrer Forschung bieten wir verschiedene Reagenzien und Instrumente für die IVF, Kryokonservierung, Vitrifikation und Embryotransfer an.

CARD MEDIUM® und FERTIUP®

Die Spermien-Kryokonservierung ist eine praktische und kostengünstige Methode, um Mausstämme im Labor zu archivieren. FERTIUP® und CARD MEDIUM® sind Hochleistungsmedien für die Kryokonservierung von Mausspermien, Spermieninkubation und In vitro Fertilisation (IVF). In Kombination bieten FERTIUP® und CARD MEDIUM® eine hohe und stabile Befruchtungsrate unter Verwendung von gefroren/aufgetautem Maussperma. Dies ermöglicht Ihnen, Mäuse zu reproduzieren, wann immer Sie sie brauchen. Das FERTIUP®-Sperma-Kryoprotektant und das Spermien-Präinkubationsmedium verbessern die Befruchtungsraten von gefroren/aufgetautem Sperma in C57BL / 6- und 129 weiteren Mäusestämmen von weniger als 10% (mit herkömmlichen Methoden) auf mehr als 30%. Darüber hinaus erhöht CARD MEDIUM® die Fruchtbarkeitsrate auf über 80%. FERTIUP® und CARD MEDIUM® weisen keinerlei Reproduktionstoxizität auf.

Das neu entwickelte System zur Spermakryokonservierung und IVF mit FERTIUP® und CARD MEDIUM® bietet eine überlegene Unterstützung für die sichere und zuverlässige Erhaltung Ihrer wertvollen Mausstämme.

Fig. 2:

• 7.5 IU of CARD HyperOva® or PMSG was injected to four weeks old female mice, then 7.5 IU of hCG was administered 48 hours later.
  Thereafter all ova obtained 17 hours after the hCG injection were collected.
• The In vitro fertilization rate is defined as the number of 2-cell embryos divided by the total number of ova (mean±SD).
• Data cited from a paper published by Prof. Naomi Nakagata and Toru Takeo (Center for Animal Resources and development, Kumamoto University)

CARD HyperOva®

Reduktion des experimentellen Tierverbrauchs (Beitrag zu 3R):
Mit CARD HyperOva® können Sie die Anzahl weiblicher Mäuse, die für die Eizellensammlung verwendet werden, um 25 – 30 % reduzieren.

Optimierung der gentechnisch veränderten Mauserstellung und -erhaltung:
Mit CARD HyperOva® können von weniger weiblichen Mäusen mehr Eizellen gewonnen werden als mit der herkömmlichen Methode, die die In-vitro-Fertilisation und den Embryotransfer erleichtert.

Anwendung auf wertvolle genetisch veränderte Mäuse:
Die Verwendung von CARD HyperOva® bei Ihren wertvollen genetisch veränderten Mäusen ermöglicht es Ihnen, eine große Anzahl von Eizellen von einer kleinen Anzahl von Weibchen zu erhalten, was eine großangelegte Vorbereitung des Embryos ermöglicht.

Periphere Produkte

Zusätzlich zu Reagenzien für Reproduktionstechniken bieten wir verschiedene Instrumente an. Zum Beispiel ein Transportkit für die cauda epididymides oder Strohhalme, um In vitro Fertilisationsschritte durchzuführen.

Vereinfachte Übersicht: Reagenzien für die In-vitro-Fertilisation

Neben dem regulären Laborbedarf, der für die In-vitro-Fertilisation bei Mäusen erforderlich ist, sollen Ihnen die folgenden Abschnitte bei der Bestimmung der erforderlichen Volumina für Ihre Experimente helfen.

Superovulation unter Verwendung von PMSG

Die Superovulation wird durch die intraperitoneale Injektion von 7,5 IU schwangeren Stuten-Serum-Gonadotropin (PMSG) in jede ausgewachsene weibliche Maus (8 - 12 Wochen alt) induziert.

PMSG wird normalerweise während des Lichtzyklus zwischen 14:00 und 18:00 Uhr verabreicht.

48 - 52 Stunden später wird humanes Choriongonadotropin (hCG) intraperitoneal injiziert.

Vorbereitung der Gefäße

Allgemeine Gefäßvorbereitung

Geben Sie etwas Medium auf ein Gefäß mithilfe einer Mikropipette.

Gießen Sie flüssiges Paraffin in das Gefäß.

Bedecken Sie den Tropfen Medium mit flüssigem Paraffin.

Spermienschale - FERTIUP Preincubation Medium (PM)

1 Tropfen (100 µl / Tropfen) FERTIUP (PM) wird in ein Gefäß gegeben und 30 Minuten vor der Sammlung der Spermien mit flüssigem Paraffin abgedeckt.

Anschließend wird das Gefäß in einen Inkubator gestellt.

Befruchtungsgefäß - CARD MEDIUM

1 Tropfen (200 µl / Tropfen für 2 Eileiter) CARD MEDIUM wird in ein Gefäß gegeben und 10 Minuten vor der Sammlung der Eizellen mit flüssigem Paraffin abgedeckt.

Anschließend wird das Gefäß in einen Inkubator gestellt.

Hinweis: Es gibt drei verschiedene Methoden zur Vorbereitung von CARD MEDIUM, abhängig davon, ob die In-vitro-Fertilisation mit frischen, aufgetauten oder bei kalter Temperatur transportierten Spermatozoen durchgeführt wird. Bitte kontaktieren Sie uns für das Anleitungshandbuch zu CARD MEDIUM.

Waschgefäß - mHTF

Es werden 4 einzelne Tropfen (80 µl / Tropfen) mHTF in ein Gefäß gegeben und mit flüssigem Paraffin abgedeckt.

Anschließend wird das Gefäß mindestens 30 Minuten in einen Inkubator gestellt.

Kryokonservierung von Mausspermien in FERTIUP

Vorbereitung der Spermien-Suspension - FERTIUP Kryoprotektant (CPA)

1 Tropfen (60 µl / Tropfen) FERTIUP CPA wird in ein 35-mm-Gefäß gegeben und mit flüssigem Paraffin abgedeckt.

Fügen Sie einen 60 µl-Aliquot derselben Lösung hinzu, um einen hohen, halbkugelförmigen Tropfen zu erzeugen (Endvolumen: 120 µL).

Später werden 10 µL der Spermien-Suspension in einen Gefrierstrohhalm aspiriert.

Vorbereitung des Gefrierstrohhalms mit Spermien-Suspension

Das Laden von 100 µL HTF in den Strohhalm verhindert, dass er auf der Oberfläche von flüssigem Stickstoff schwimmt.

In-vitro Fertilisation unter Verwendung von in FERTIUP kryokonservierten Spermien

1 Tropfen (90 µl / Tropfen) FERTIUP (PM) wird in ein Gefäß gegeben und 30 Minuten vor dem Auftauen eines gefrorenen Strohhalms mit flüssigem Paraffin abgedeckt.

Anschließend wird das Gefäß in einen Inkubator (37°C, 5% CO₂ in Luft) gestellt.

Vorbereitung der Gefäße für Fertilisation und Waschung

1 Tropfen (90 µl / Tropfen für bis zu 4-6 Kumulus-Oozyten-Komplexe (COCs)) CARD MEDIUM wird in ein Gefäß gegeben und 10 Minuten vor der Sammlung der Eizellen mit flüssigem Paraffin abgedeckt.

Anschließend wird das Gefäß in einen Inkubator (37°C, 5% CO₂ in Luft) gestellt, mindestens 30 Minuten lang.

Es werden 4 einzelne Tropfen (80 µl / Tropfen) HTF in ein Gefäß gegeben und mit flüssigem Paraffin abgedeckt.

Anschließend wird das Gefäß mindestens 30 Minuten in einen Inkubator (37°C, 5% CO₂ in Luft) gestellt.

Tabelle 2: Übersicht über die verschiedenen Set- und Kit-Komponenten. Bitte lesen Sie die Anweisungen des Herstellers sorgfältig durch, um die richtigen Volumina zu bestimmen.

Relevante Produkte für die unterstützte Reproduktionstechnologie